中国小儿血液与肿瘤杂志

2017, v.22(03) 123-130

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慢病毒介导CX43基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞体系的建立及鉴定
Construction and identification of lentivirus mediated CX43 gene modified mouse bone marrow mesenchymal stem cells

王亚萍;司英健;王艳;邢国胜;王洋;封志纯;

摘要(Abstract):

目的建立慢病毒介导间隙连接蛋白43(CX43)基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体系并进行鉴定,为研究CX43过表达BMSCs在移植物抗宿主病中的作用奠定实验基础。方法采用全骨髓贴壁分离培养法获取小鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞表面标志和成骨、成脂、成内皮细胞诱导分化能力;重组慢病毒载体pHBLV~(TM)-CX43-GFP、pHBLV~(TM)-GFP转染BMSCs,未转染慢病毒的BMSCs为空白对照,应用细胞免疫荧光、免疫组化法和Western blot方法检测各组CX43的表达。结果流式细胞术检查示BMSCs表达CD73,CD44,CD29和CD90,不表达CD34,CD105;成骨诱导21d茜素红染色呈红色结节,成脂诱导分化14d可见明显脂滴并油红染色阳性,成内皮细胞诱导分化21d免疫荧光示内皮细胞标识CD31,CD34表达明显增加,接种于Matrigel基底胶上具有成小管能力;免疫荧光、免疫组化和Western blot方法均显示CX43基因修饰的BMSCs的CX43蛋白表达明显增加。结论成功建立了小鼠BMSCs分离培养法和CX43基因体外转染BMSCs体系。

关键词(KeyWords): 骨髓间充质干细胞,小鼠;间隙连接蛋白43;慢病毒;转染

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目资助(编号:31300474)

作者(Author): 王亚萍;司英健;王艳;邢国胜;王洋;封志纯;

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